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自身抗体检测的质量控制和检验程序

作者 仲人前 来源 第二军医大学长征医院 点击率 7379 添加时间 2012/2/22

    自身抗体检测以在临床广泛应用,如诊断和鉴别诊断、判断疾病活动程度、判断治疗效果和预后等。检测自身抗体的方法有很多,本文主要介绍以Hep2细胞为基质的间接免疫荧光法检测抗核抗体的质量控制和检验程序。

一、分析前的试剂和检测准备

(一)HEp-2细胞 要求玻片上细胞密度适当和分布均匀;200倍高倍镜下每个视野至少有3-5个有丝分裂相细胞;能表达相关抗体的靶抗原;细胞形态学稳定;背景荧光低。

(二)检测场所 应有单独的区域进行检测操作和荧光显微镜观察;确保环境洁净、尘埃少;显微镜室至少能容纳二个人同时工作;通气良好;实验室计算机联网有利于简化工作程序和记录。

(三)标本采集和保存 本实验用血清;血清保存在4 ◦C,72小时内可用;如保存于-20 ◦C或更低,可用时间则更长,但不要反复冻融。

(四)抗人IgG荧光抗体  应具有IgG特异性;FITC/蛋白比值约3.0;抗体/蛋白比值≥0.1;特异抗体含量为30-60μg/ml;确定工作稀释度。

二、检测程序

(一)标本处理  检测自身抗体的分析前程序并非关键。但对溶血、脂血和黄疸应作记录,因有可能影响检测系统;分析过程必须按照厂方说明进行;孵育时间、标本稀释或缓冲系统的差异均能影响结果,故应对方法学进行确认。标本处理过程常在常温下进行;保持检测系统的完整性;注意过期日期及试剂的正确贮存条件。如二抗,贮存不当会导致自身抗体效价明显下降;建议实验室各自建立每种玻片的最佳容量并写入SOP中;每个孵育过程应放在潮湿箱内以防标本干燥;准确加样,不溢出到邻近区域;孵育、洗涤按要求进行;读片后,玻片置于冰箱,可保存24小时。如要保存更长时间,可将玻片密封包好置−20◦C 。

(二)血清稀释  按试剂说明书要求稀释血清;阳性结果时,血清进行等比稀释。

(三)  质控品  阳性和阴性质控品应如同标本一样进行相同的操作过程;对于重要的荧光图型,每个一定间隔,应采用疾病特异的自身抗体阳性质控品;阳性质控品有商品化的,也可实验室自己制备;理想化的是应用商品化或CDC的特定质控品;根据国家标准和指南,参加独立于供应商的室间质评。

(四)  显微镜 首先要判断荧光强度;应重视有丝分裂,判断基本图型;更换灯泡后,应对显微镜作一定的校准。

三、结果的评价和解释

    检验报告中必须描述每个图型及其滴度;有的图型具疾病相关性,也可提示做特异性免疫检测。如遇到图型不典型、意义不明确,也应在检验报告中有注解以便临床医师知晓;检验报告应由资深人员出具;各实验室应建立自己的参考区间。

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    新闻评论30 条评论
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    30 条评论